廣州沃霖承接細胞培養實驗室工程
廣州沃霖承接細胞培養實驗室工程
一、細胞培養實驗室的設計與布局
細胞培養實驗室應能進行六方面的工作:無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒自凈處理、儲藏。
1.無菌操作區
(1)無菌操作區:無菌操作區只限于細胞培養及其他無菌操作的區域,能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。
理想的無菌操作室應劃為三部分:
a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無菌環境,同時可放置恒溫培養箱及某些必需的小型儀器。
c) 無菌操作間—―于無菌操作、細胞培養。其大小要適當,且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效自凈效果;墻壁光滑*以便清潔和消毒。工作臺安置不應靠墻壁,臺面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。
(2)凈化工作臺:操作簡單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細菌培養室使用的凈化工作臺主要有兩種:a)側流式或稱垂直式 b)外流式或稱水平層流式。
2.孵育區
本區對無菌的要求雖不比無菌區嚴格,但仍需清潔無塵,因此也應設置在干擾少而非來往穿行的區域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進行,后者費用高,一般實驗室多采用孵箱進行工作。
3.制備區
在該區主要進行培養液及有關培養用的液體等的制備。
4.儲藏區
主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養液、培養瓶等,此環境也需要清潔無塵。
5.清洗和消毒自凈區
清潔和消毒自凈區應與其他區域分開,主要進行所有細胞培養器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作。
二、細胞培養實驗室基本技術
一).洗滌技術
1.洗滌液
鉻酸洗滌液是用重鉻酸鉀(K2Cr2O7)與硫酸(H2SO4)配制而成,可根據需要配制成弱、中、強三種。
弱 用重鉻酸鉀50g加入蒸餾水1L,加熱溶化,冷卻后再緩慢加入濃硫酸90ml。
中 用重鉻酸鉀50g加入蒸餾水100ml,加熱溶化,冷卻后再緩慢加入濃硫酸875ml。
強 與濃硫酸加熱的同時緩慢加入磨碎的重鉻酸鉀,直到重鉻酸鉀達到飽和為止。一般濃硫酸1L加入重鉻酸鉀50g。
2.洗滌方法
玻璃器皿洗滌
塑料用品洗滌
金屬用品洗滌
二).自凈、消毒技術
處理方法:物理自凈 干熱、濕熱、射線處理、物理除菌 過濾、離心沉淀等
化學方法:消毒劑、抗菌素自凈
1.培養基自凈
2.玻璃器皿自凈
3.金屬用具自凈
4.接種室自凈
5.外植體自凈
幾種常用消毒劑的效果比較
消 毒 劑 | 使用濃度(%) | 消毒時間(分) | 效 果 | 殘液去除難易 |
次氯酸鈣 | 10 | 5~30 | 好 | 易 |
次氯酸鈉 | 2~5 | 5~30 | 好 | 易 |
新潔爾滅 | 10~20 | 5~30 | 好 | 易 |
氯化汞 | 0.1~1 | 2~10 | zui難 | |
過氧化氫 | 10~12 | 5~15 | 較好 | zui易 |
抗菌素 | 4~50mgl-1 | 30~60 | 較好 | 較難 |